التقنيات الاحيائية تناقش رسالة ماجستير حول تثبيط إنزيم الأنهيدراز الكربوني المنقى من كريات الدم الحمراء البشرية بشكل طبيعي
بحضور السيد عميد الكلية أ.د محسن هاشم رسن المحترم، ناقشت كلية التقنيات الاحيائية، رسالة ماجستير للطالبة(ميسر عبدالله برتو) والموسومة:
( Inhibition of
carbonic anhydrase enzyme purified from human erythrocyte by natural
products)
وكانت الرسالة بإشراف ( ا.د أسماء علي حسين ) نوقشت الرسالة في تمام الساعة 9 صباحا الخميس 30 /04/ 2023 في قاعة كلية التقنيات الاحيائية، وترأس اللجنة الاستاذ الدكتور (نضال سهیل زیار) كلية التقنيات الاحيائية/ جامعة النهرين
فيما ضمت اللجنة عضوية كل من
– ا.م.د سحر ارحيم حسين/ جامعة بغداد / كلية العلوم
– ا.م.د رقية محمد إبراهيم/ جامعة النهرين/ كلية التقنيات الاحيائية،
و كان هدف الدراسة تثبيط انزيم الكربونيك انهيدراز والغاية منها تطوير الادوية لعلاج الجلوكوما، والسمنة والصرع وعدم التوازن الحمضي القاعدي وكذلك السرطان. لذلك استندت النتائج المعروضة في هذه الدراسة على جمع 50عينه من كريات الدم الحمراء لمرضى الزرق او المياه الزرقاء اوالجلوكوما (ضغط العين المرتفع) من مستشفى ابن الهيثم في بغداد و50عينه من اشخاص سليمين. تم تنقية انزيم الكربونيك انهيدراز بواسطة الترسيب بكبريتات الامونيوم بنسبة تشبع %80 ثم بواسطة كروماتوجرافيا التبادل الايوني باستخدام ثنائي اثيل امينو اثيل سيليلوز وأخيرًا عن طريق كروماتو غرافيا الترشيح الهلامي باستخدام سيفادكس 150-G. وفي اخر
خطوة للتنقية بلغت الفعالية النوعية للانزيم المنقى 145 وحدة/ملغم بروتين و بعدد مرات تنقية 15.9وحصيلة انزيمية 63.2%. كان الأس الهيدروجيني الامثل لفعالية الكاربون انهيدراز 8 كما كان ثابتًا ضمن الأس الهيدروجيني 7 و 8. وقد لوحظ ان اقصى درجة حرارة لنشاط الانزيم كانت 37 درجة مئوية وتراوحت درجة الثباتية بين 32-42 درجة مئوية، اجريت دراسة برنامج الالتحام الجزيئي (الدوكنك) لاختيار اقوى مثبط لنشاط انزيم الكاربونيك انهيدراز وفقًا لالفة ارتباط كل من الكركمين والكسيلوبروبامين والاثيل ايزو الوكليت للانزيم وقد اظهرت النتائج بأن الكركمين لديه اقوى طاقة تفاعل مع الكاربونيك انهيدراز (-7.4 كيلوكالوري/مول) متبوعًا بالايثيل ايزو الوكولات واكسيلوبروبامين (-6.2, -5.5كيلو كالوري/مول على التوالي). بعدها تم
اخضاع الكركم للاستخلاص باستخدام الميثانول وتم تقدير محتوى الفلافونويد الكلي للكركمين )284.54±13.11مايكرو غم/مل). كما تم تحديد نشاط مضادات الاكسدة بواسطة فحص FRAP. وقد اظهرت نتائج ال FRAP ان الكركمين والنانوكركمين تراوحت نسبهم من-0.987 )0.988-0.667, 0.468)على التوالي من ناحيه اخرى بينت نتائج تثبيط الكاربونك انهيدريز ان الكركمين المستخلص والنانوكركمين لهما القابلية على تثبيط الانزيم بنسب تثبيط مختلفه تراوحت بين 10-99% مقارنة مع الاستيزيلومايد (100%(, على كل حال كان النانوكركمين هو اكثرالمثبطات فعالية وبنسبة (99%). لتقييم التأثير السام لمستخلص الكركمين والمركب النانوي الكركمين، تم اجراء اختبار MTT على خط الخلية السرطانية HepG2 بالاضافة الى خط الخلية الطبيعي WRL68. وقد اظهرت النتائج ان النانوكركمين له نشاط عالٍ مضادٍ للأورام مع IC50 (45.80 مايكرو غم/مل بينما اظهر الكركمين فعالية اقل مع IC50 (134.2 مايكرو غم/مل). أيضًا تم تحديد اختبار المستوى العالي )HCS( للنانوكركمين (اكثرالمثبطات فعالية) وقد اشارت النتائج ان تعرض خلية HepG2 لتركيز عالي )200 مايكرو غم/مل)،النانوكركمين أثرت على عدد الخلايا الحية ونفاذية غشاء الميتوكوندريا وشدة السيتوكروم ج لايتأثر. وأخيرًا تم تقدير انشطة كاسباس 8 و كاسباس 9 وقد وجد ان النانوكركمين قام بتفعيل انتاج كاسباس 8 و كاسباس 9 اعتمادًا على الجرعة ، وبعد ان استطاعت الباحثة الدفاع عن موضوع بحثها واخذت اللجنة بنظر الاعتبار الجهود المبذولة من قبل الباحثة واستخدامها المراجع الحديثة تم قبول الرسالة ومنحها درجة الماجستير.
