كلية التقنيات الأحيائية تشهد مناقشة اطروحة دكتوراه
برعاية السيد عميد كلية التقنيات الاحيائية الاستاذ الدكتور كاظم محمد ابراهيم المحترم تمت والحمد الله مناقشة اطروحة دكتوراه للطالبة هاله كمال محسن القزاز بكلوريوس تقنيات احيائية ، كلية العلوم ، جامعة بغداد، 2005ماجستير في الهندسة الوراثية والتقنيات الأحيائية, معهد الهندسـة الوراثية والتقنيات الأحيائية للدراسات العليا، جامعة بغداد ،2014 في يوم الثلاثاء 20/10/2020 وعلى قاعة كلية التقنيات الاحيائية للمناقشات وتحت اشــراف الاستاذ الدكتورة سلوى جابر العوادي وكان عنوان اطروحتها (تأثير مثيلة الدنا والتعبير الجيني لجينات H19 و SNRPN و LINE-1 على مرضى قليلي النطف في العراق) وتشكلت لجنة المناقشة من :
- الأستاذ المتمرس د. وليد حميد يوسف رئيساً
- أ.د حسن محمد نايف/ كلية التقنيات الاحيائية عضواً
- أ.م.د منال طه متعب/ المعهد العالي للتقنيات المساعدة على الانجاب عضواً
- أ.م.د وئام احمد عبد العباس/ معد الهندسة الوراثية جامعة بغداد عضواً
- أ.م.د هبة منير عبد الحسين قسم العلوم التطبيقية الجامعة التكنولوجيا عضواً
- أ.د سلوى جابر العوادي كلية التقنيات الاحيائية عضواً مشرفاً
وقد اجيزت اطروحة الطالبة والتي تضمنت محاور عده منها دراسة مثيلة والتعبير الجيني لجينات يتوقع لها علاقة وثيقة بالمرضى قليلي النطف. خرجت الاطروحة بتوصيات مهمة في مجال العقم والمساعدة على الانجاب. مبارك للطالبة ولكليتنا هذا الانجاز.
يُعرف العقم عند الرجال بأنه عدم قدرة الذكر على احداث الحمل مع أنثى خصبة . تبلغ نسبة العقم عند الرجال حوالي 36٪ من الحالات في العراق. الهدف من الدراسة هو استكشاف العلاقة بين التعديلات اللاجينية (أنماط مثيلة الحمض النووي ومستويات التعبير الجيني) في جينات H19 ، SNRPN و LINE-1 بين الذكور العقيمين الذكور الخصبين في عينات السائل المنوي للرجال العراقيين. تم جمع نوعين من العينات من السائل المنوي وعينات الدم من 100 شخص (50 الذكور العقيمين و 50 الذكور الخصبين) تتراوح أعمارهم بين (20-50) سنة . فحص السائل المنوي مجهريا لمعلمات السائل المنوي (عدد الحيوانات المنوية و حركة الحيوانات المنوية والشكل المظهري للحيوانات المنوية). اظهرت نتائج الفحص المجهري لعينات السائل المنوي أن جميع معلمات السائل المنوي أنتجت فرقًا معنويًا أقل للذكور العقيمين من مجموعة الذكور الخصبين P<0.01)). تم جمع عينات الدم (5 مل من الدم الوريدي) لكلتا المجموعتين الذكور العقيمين و الذكور الخصبين في أنابيب هلام للتحليل الهرموني لتقدير تراكيز الهرمون المنبه للجريب والهرمون اللوتيني وهرمون الشحمون الخصوي في مصل الدم باستخدام عدد الامتزاز المناعي للانزيمات المرتبطة (مقايسة الممتص المناعي المرتبط بالانزيم) للهرمونات في مصل الدم وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. اظهرت نتائج الفحص الهرموني فروق معنوية كبيرة في هرمون تحفيز الجريبات وهرمون اللوتين وهرمون الشحمون الخصوي (p <0.05) بين مجموعتي الذكور العقيمين و الذكور الخصبين. من جهة اخرى، كانت نتيجة استخلاص الحامض النووي من عينات السائل المنوي انتاج حزم جيده و حاده (حزم الحامض النووي النقي) عند الترحيل الكهربائي في الهلام وبتركيز يتراوح بين 80–120 نانوغرام / مل وبنسبة 260/280 تتراوح بين 1.8 و 1.9. تم تحويل الحمض النووي الجيني إلى نمط مثيلة بواسطة عدة تحويل متخصصة ثنائية كبريتيت باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت اللحظي. تم تحليل منحنى الذوبان عالي الدقة حول الحامض النووي إلى حامض نووي ميثلي والى حامض نووي غير ميثيلي بواسطة تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الوقت اللحظي. حيث أظهرت نتيجة تحليل منحنى الذوبان عالي الدقة باستخدام بادئات مثيلة متخصصة للجينات H19 ، SNRPN ، و LINE-1 انخفاضًا ملحوظًا في مستوى مثيلة الجينات) H19-1 و H19-2 و LINE-1 ( بشكل ملحوظ بالنسبة إلى مجموعتي الذكور العقيمين و الذكور الخصبين (انخفاض المثيلة) P=0.001)) . في المقابل ، كانت نتيجة مستوى مثيلة الجين SNRPN أعلى بشكل ملحوظ لـلذكور قليلي النطف من مجموعة الذكور الخصبين (فرط المثيلة)P=0.212)). علاوة على ذلك ، اوضحت نتائجنا وجود معامل ارتباط سلبي بين أنماط المثيلة H19 وعدد الحيوانات المنوية (-0.36) وحركة الحيوانات المنوية (-0.30). بينما، اظهر معامل ارتباط موجب مع الحيوانات المنوية غير المتحركة (+0.30). من ناحية أخرى ، لم يكن هناك أي معامل ارتباط بين المستوى المثيلي H19 و المظهرالطبيعي للحيوانات المنوية كذلك مع المظهرغير الطبيعي للحيوانات المنوية. من ناحية أخرى ، أظهرت نتيجة النمط المثيلي للجين SNRPN مع عدد الحيوانات المنوية (-0.46) وكذلك مع حركة الحيوانات المنوية معامل ارتباط سلبي (-0.31). في حين كانت نتيجة النمط المثيلي للجين SNRPN معامل ارتباط إيجابي مع الحيوانات المنوية غير المتحركة (+0.31). أظهرت نتيجة معاملات الارتباط للنمط المثيلي LINE-1معامل الرتباط سلبي مع عدد الحيوانات المنوية (-0.35) وكذلك مع حركة الحيوانات المنوية (-0.39). بينما اظهر معامل ارتباط موجب لنمط المثيل LINE-1 مع االحيوانات المنوية غير المتحركة (+0.32) وكذلك مع المظهر الطبيعي للحيوانات المنوية (+0.39). كانت نتيجة استخلاص الحمض النووي الرايبي من عينات السائل المنوي من المجموعتين الذكور العقيمين و الذكور الخصبين (عدد = 100) وتحويله إلى الحامض النووي المتمم باستخدام تفاعل النسخ العكسي الكمي لسلسلة تفاعل البلمرة. تم تحويل كل عينة من الحمض النووي الرايبي المرسل إلى الحامض النووي المتمم واستخدمت عدة متخصصة من البوادئ للجينات H19 و SNRPN و LINE-1 واستخدم جين مرجعية بيتا-غلوبين لتقدير مستوى التعبير الجيني باستخدام تقنية التفاعل العكسي الكمي لسلسلة تفاعل البلمرة. حيث تم تسجيل نتيجة β-globin لمجموعتي الذكورالعقيمين 17.006 والذكور الخصبين 17.06 (P= 1) حيث استخدمت لمعايرة قيم Ct الأخرى في الدراسة الحالية. كانت نتيجة قيمة Ct لـ H19 لمجموعتي الذكورالعقيمين 20.10 والذكورالخصبين 21.36 (P= 0.052) ، كانت قيمة Ct لـ SNRPN لمجموعتي الذكورالعقيمين 21.33 و الذكورالخصبين 21.18 (P= 0.813 ، وكانت قيمة Ct لـ LINE-1 لمجموعتي الذكورالعقيمين 18.96 و الذكورالخصبين20.77 (P= 0.216). لم تكن نتيجة قيمة Ct لـ H19 و SNRPN و LINE-1 فروق ذات دلالة إحصائية بين مجموعتي الذكورالعقيمين والذكورالخصبين. كانت نتيجة ΔCt لـ H19 لمجموعتي الذكور العقيمين 3.1 و الذكور الخصبين 4.36 (P=0.020) ، كانت ΔCt لـ SNRPN لمجموعتي الذكور العقيمين 4.33 و الذكور الخصبين ((P=0.810. كان ΔCt لـ LINE-1 لمجموعتي الذكور العقيمين 1.96 و الذكور الخصبين 3.77 (P = 0.002). أظهرت هذه النتيجة فرقًا معنويا بين مجموعتي الذكور العقيمين و الذكور الخصبين لجين ΔCt H19 و ΔCt LINE-1 الجين. في المقابل ، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية بين مجموعتي الذكور العقيمين الذكور الخصبين لـ ΔCt لجين SNRPN ، وكانت نتيجة ∆∆Ct لمجموعة الذكور العقيمين كانت H19 ∆∆Ct -1.26 وكان ∆∆Ct SNRPN 0.015 وكان ∆∆Ct LINE-1 -1.81. كانت نتيجة تغيير التعبير الجيني 2^-ΔΔCt لمجموعة الذكورالعقيمين كان لـ H19 2.4 و SNRPN 0.98 و LINE-1 3.5. كانت نتيجة التغيير في الطي لمستوى التعبير الجيني H19 هي مرتفع التنظيم ، وكان مستوى التعبير الجيني SNRPN منخفض التنظيم ، وكان مستوى التعبير الجيني LINE-1 هو مرتفع التنظيم ايضا.
