جريت المناقشة العلنية لطالبة الدكتوراة (نبراس رضا محمد حسن) وذلك في يوم الخكيس المصدف الحادي عشر من شهر اذار الجاري وعلى قاعة المناقشات في الكلية في بناية الفاو وبحضور السيد عميد الكلية المحترم الاستاذ الدكتور كاظم محمد ابراهيم الصميدعي, وقد تالفت لجنة المناقشة من عضوية كل من أ.د محسن هاشم رسن/رئيساً, أ.د اسماء محمد صالح/عضوأ, أ.د أسماء علي حسين/عضواً, أ.د قيس قاسم غيم/عضواً, أ.م.د ثناء رشيد عبد الرحمن/عضواً و أ.د سلوى جابر عبد الله العوادي/عضواً ومشرفاً.
تضمنت الاطروحة كلونة جين sak من بكتريا طافرة S.aureus في بكتريا اخرى بكتريا مؤهلة قياسية Competent cell E.coli
لتحديد أعلى انتاج للانزيم ودوره في التطبيقات الطبية .
تضمنت الدراسة ٥٠٠ عزله معزوله من مصادر سريريه مختلفة
ودراسة فحص حساسيتها للمضادات
ثم فحص انتاج انزيم تحلل الخثرة Staphylokinase وثم التطفير الكيميائي بإستخدام مطفرات كيميائية Acridine orange ,Hydroxyleamine
Ethylemethanesulfonate
بتراكيز مختلفة ،ثم تضخيم الجين sak
ودراسة تسلسل القواعد النتروجينية DNA sequencing وتسجيل ٦ سلالات في بنك الجينات الامريكي
ورسم البروتين ودراسة الشجرة التطورية مع باقي السلالات في امريكا وكندا والصين واليابان
ووجد هناك طفرة في الجين ادت الى زيادة انتاج الانزيم هو تحول القاعدة النتروجينية من ادنين الى كوانين
ادت الى تغير في الحامض الاميني من كلايسين الى سيرين في مواقع مختلفة في الجين في الموقع الفعال الانزيم Active site الذي سبب زيادة في انتاج انزيم تحلل الخثرة
تمت عملية الكلونة Cloning الهندسة الوراثية genetic engineering باستخدام انزيمات قاطعة EcoRI و BamHI
لتقطيع الجين sak الطافر وتقطيع ناقل الكلونة M13 و ناقل الكلونة pET32a
واستخدام انزيم الربط T4DNA ligase
ثم عمليه التحول transformation في الخلايا البكتيريا المؤهله E.coli DH5alpha
استخدم ناقل كلونة العاثي البكتيري bacteriophage M13 لاول مرة في العالم في كلونة الجين sak الطافر
واستخدم ناقل الكلونة البلازميدي pET32a في كلونةالجين الطافر sak
نجحت عمليه الكلونة التحول في ١٤ سلاله من اصل ٢٠ سلاله
ثم تنقية الانزيم الهجين من بكتريا E.coli الهجينة بأستخدام تقنيه المبادل الايوني الكروموتوغرافي ion exchange chromatography و gel filtration chromatography
للحصول على الانزيم بشكل نقي
ثم تم تطبيق الانزيم في تحلل الخثرة المتكونة بعد تجلط الدم
ووجد ان الانزيم حلل الخثرة المتكونة في الدم خلال ثواني وفي حجم قليل جدا
مقارنة بالانزيم قبل اجراء عمليه الكلونة والتطفير
وهذا اثبات ان الانزيم الهجين يمكن تطبيقه طبيا في علاج الجلطات thrombosis وهو انزيم كفوء وفعال في اذابه الخثرة المسببة للجلطه.
الف مبروك للطالبة ومشرفتها الامتياز متمنين لها دوام الموفقية والنجاح ان شاء الله.
