اجريت المناقشه العلنيه لطالبةالدكتوراة (نور عبد اللطيف عبد الله)عن اطروحتها الموسومة
Anticancer and immunological evaluation of purified cystosine deaminase produce from locally isolates Peseudmonas aeruginosa
في الساعه ٩ يوم الاحد الموافق26-3-2023 على قاعة كلية التقنيات الاحيائية
وترأست الاستاذ الدكتورة شهلاء مهدي صالح رئيسة قسم التقنيات الحيوية الجزيئية والطبية في كلية التقنيات الإحيائية جامعة النهرين لجنة المناقشة، فيما ضمت اللجنة عضوية كلا من:
ا.د فراس عبدالله حسن جامعة النهرين- كلية العلوم- عضوا
ا.د محمد محمود فرحان/جامعة النهرين- مركز بحوث التقنيات الاحيائية- عضوا
٤- ا.م.د علياء رزوقي حسين/ جامعة بغداد-كلية العلوم – عضوا
٥- ا.م. د ميادة صلال مهدي / جامعة النهرين- كلية التقنيات الاحيائية -عضوا
٦- ا.م.د. رقية محمد ابراهيم/جامعة النهرين- كلية التقنيات الاحيائية- عضوا ومشرفا
٧- ا.د نضال سهيل زبار /جامعة النهرين- كلية التقنيات الاحيائية
اعتمدت النتائج المقدمة في هذا الدراسه على جمع 120 عينة مرضية من مصابين بالحروق
والجروج والتهابات المسالك البولية من مستشفى اليرموك التعليمي في بغداد .اظهرت نتائج التشخيص الاوليه والثانوية التي اعتمدت على الصفات المظهرية والزرعية والفحوصات الكيموحيوية ان 50 عزلة عزلة تنتمي الى الزائفة الزنجارية Pseudomonas aeruginosa. وقد تم تاكيد هذه النتيجة باستخدام نظام VITEK .اختبرت قابلية العزلات السبع في انتاج انزيم ارجنينيز
واظهرت النتائج ان جميع هذه العزالت كانت منتجة الارجينيز وبدرجات متفاوتة وقد وجد ان العزلة
Ps2 aeruginosa Pseudomonas اذ اعطت اعلى فعاليه نوعيه 0.360 وحده /مليغرام بروتين لذلك تم اختيارها لتكملة الدراسة .تم تحديد تاثير مكونات الوسط الزرعي على انتاج انزيم الارجينيز وقد كانت اعلى انتاجية للانزيم بعد دعم الوسط الانتاج 1% مالتوز و 1 % تريبتون و 1.5% ارجنين وعند 7.5 الرقم الهيدرجيني وحضن بدرجه حراره 37 درجة مئوية لمدة 36 ساعه .تحت هذه الظروف نقي انزيم االرجنينيزبثلاثه خطوات شملت الترسيب بنسبة كبريتات الالمونيوم بنسبة اشباع 87.7 % ثم تبادل الايوني باستخدام عمود دي اثيل امينو اثيل سيليوز والخطوة الاخيرة من خلال كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي باستخدام عمود 150-sephadex G وقد وصلت الفعالية النوعية كان لانزيم المنقى 76.9 الى وحدة / ملغم بروتين بعدد مرات تنقية 11.5 وحصيله انزيمية %50. عند دراسة الخصائص الكيموحياتية لأنزيم الارجينيز ،قد اعطى الانزيم اعلى فعالية عند الاس الهيدروجيني )6,7,8) وكان ثابتا ضمن الرقم الهيدروجيني 8. كما لوحظ ان اقصى فعالية لالنزيم عند درجة حرارة 40 مئويه وكان أكثرثباتية عند درجات الحرارة تراوحت بين 40-30 درجة مئوية ..من جهه اخرى فقد ثبطت الفعالية الانزيمية بوجود كل من ثنائي امين االيثيلين رباعي حمض االسيتيك بينما ازدادت الفعالية الانزيميه المتبقية بوجود كل من كلوريد المنغنيز والمغنيسيوم والزنك والنحاس و ادى الى زيادة الفعالية المتبقية للانزيم (80% and ،%107، %123، 140%) على التوالي. تمت دراسة التاثير السمي والتثبيط الخلوي لخلايا سرطان الثدي MCF7، الكبد HepG2, و البروستات PC3 السرطانية، وقد بلغ اعلى تثبيط انزيمي على خلايا سرطان الثدي وبتركيز مثبط وسطي بلغ 116.0 ميكروغرام/ مل بالمقارنة مع الخلايا الطبيعيه. كما ان الانزيم لم يظهر اي تاثير سمي على الخلايا الطبيعية. تم اخذ خمس تراكيز من الانزيم المنقى (200، 100، 50، 25، and 12.5 μg/ml) على الخلايا الثدي السرطانيه لتحديد التغييرات الخلويه الست
viable cell count VCC, nuclear intensity NI, cell membrane permeability ( CMP, mitochondrial membrane potential MMP and cytochrome C) واظهرت الدراسه ان تركيز (200 μg/ml) اعلى فعاليه من بين العوامل الخلويه مقارنه بالنماذج الطبيعيه. اظهرت نتائج تاثير الانزيم على الطور الخلوي لانقسام وانتشارخلايا الثدي السرطانيه الى تجمع الخلايا عند الطور G1 لهذا السبب منع الانتقال من بين الاطوار عند تركيز 400 μg/ml.الجزء الاخر من دراسه الانزيم على انتاج cytokines المناعيه (IL-12 and TNF-α) من خلايا سرطان الدم مقارنه مع خلايا لاشخاص سليمين ،تبين التاثير غير معنوي. الجزء الاخير من هذه الدراسه اظهرت نتائج تاثير الانزيم على زياده انتاج السايتوكانيات المناعيه 9 Caspase (3/7 and لخلايا سرطان الثدي )2236±60435 and 53099±3133(على التوالي عند تركيز الانزيم
(200 μg/mL) خلال 24 ساعه
كل التوفيق
