تمت مناقشة رسالة ماجستير في كلية التقنيات الأحيائية بعنوان “Cytotoxic potential of L-methioninase enzyme purified from clinical isolates of Pseudomonas spp” قدمت الرسالة من قبل الباحثة آية سعدون داود باشراف أ.د رقية محمد أبراهيم ، هدفت الدراسة إلى جمع (150) عينة مرضية من مصادر مختلفة (الحروق, الجروح, التهابات الاذن, البلغم, والتهابات المجاري البولية) لهذه الدراسة من مستشفيين حكوميين. وبناءً على نتائج التشخيص المظهري والكيموحيوي قد تبين أن (33) عزلة من هذه العزلات كانت من نوع Pseudomonas spp . كما تم استخدام نظام VITEK-2 لتأكيد نتائج التشخيص. اُختبرت قابلية هذه العزلات لإنتاج انزيم L- methioninase و أظهرت النتائج أن (15) عزلة فقط تنتج انزيم MGL بمستويات مختلفة. وكانت العزلة P.aeruginosa A6 أعلى كفاءة في الإنتاج ولذلك، تم اختيار P. aeruginosa A6، من أجل إنتاج وتنقية L- methioninase في الخطوة الاتية . كما تضمنت الدراسة اختبار الظروف المثلى لإنتاج انزيم L- methioninase ، وأظهرت النتائج أن كمية L- methioninase المنتجة من البكتريا تزداد عند إضافة 1% سكروز و1% كازين (كمصادر كربون ونيتروجين على التوالي) الى الوسطM9 المعدل مع مستوى حامضي 7.0pH=. ولفترة حضن لمدة 48 ساعة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. تضمنت الدراسة ايضاً، تنقية L-methioninase في ثلاث خطوات شملت؛ أولاً الترسيب بتشبع كبريتات الأمونيوم بمعدل 70% ، ثانياً كروماتوجرافيا التبادل الأيوني باستخدام عمود DEAE-Cellulose، بينما كان عمود كروماتوجرافيا الترشيح الهلامي Sephadex G-150 هو الخطوة الأخيرة. حيث زاد النشاط المحدد لـ MGL المنقى إلى 18.6 وحدة/مجم من البروتين، بعد تنقيته بالترشيح الهلامي. كما تم تحديد الوزن الجزيئي لـ L-methioninase المنقى وقد وجد بأنه يساوي 55 كيلو دالتون باستخدام SDS-PAGE . اظهرت نتائج التأثير السمي الخلوي لانزيمMGL على الخلايا السرطانية، باستخدام تراكيز مختلفة (25-400 ميكروجرام/مل) من L- methioninase على خطوط الخلايا السرطانية الكبدية HepG2 والقولون CaCo-2 باستخدام اختبار .MTT وقد اوضحت النتائج ان انزيم L- methioninase له القابلية على تثبيط نمو الخلايا السرطانية الحية بالاعتماد على التركيز. وقد امتلك القابلية على تثبيط نمو الخلايا الكبد السرطانية الحية HepG2 لـMGL الخام مع IC50 قدره 140.0 ميكروغرام/مل بالمقارنة مع IC50 67.44 ميكروغرام/مل للإنزيم المنقى. بينما اظهرت نتائج السمية الخلوية لانزيم L-methioninase الخام قدرته على تثبيط نمو خلايا القولون السرطانية مع IC50 يبلغ 154.3 ميكروغرام/مل بالمقارنة مع IC50 20.57 ميكروغرام/مل للإنزيم المنقى. كما الجدير بالذكر، أن خط الخلايا الطبيعية HdFn لم يتأثر بشكل كبير بالإنزيم. أظهرت جميع النتائج المذكورة أعلاه, أن هنالك نشاط سمي خلوي لأنزيم L-methioninase المنقى والخام المعزول من P. aeruginosa بأتباع طرق تنقية مختلفة.
